液相色谱仪（HPLC）作为实验室分析领域的”心脏”，其性能稳定性直接决定检测数据的可靠性。但多数从业者往往忽视日常维护，直到故障频发才紧急报修，造成停机损失。本文从系统精度校准、关键部件养护和数据异常诊断三个维度，为您量身定制年度自查清单，让问题消灭在萌芽阶段。

1. 管路密封性测试

目视检查：逐段检查泵入口至检测器的PEEK管路，重点观察接头处是否有液体渗出。新换管路需用1N NaOH浸泡30分钟后冲洗，避免残留污染。

耐压测试：断开色谱柱，用100%甲醇以2.0mL/min流速冲洗系统30分钟，若压力波动超过±0.5MPa，需逐一排查单向阀、密封圈等易损件。单向阀球座若出现磨损（表面可见麻点），直接影响泵压力稳定性。

2. 泵系统压力异常诊断

压力骤升：可能为色谱柱堵塞或保护柱失效，需切换至备用柱测试。若压力仍超15MPa（C18常规柱），则需将柱温箱设为40℃，用纯甲醇反向冲洗，流速递增至1.0mL/min。

压力骤降：多为管路破裂或接头松动，用肥皂水涂抹接头处，观察气泡生成点（常见于泵出口三通阀）。

1. 紫外检测器基线稳定性检查

基线噪音测试：在254nm波长下，关闭氘灯预热30分钟后，记录1小时基线数据，要求基线噪音≤±2×10⁻⁵AUFS，漂移≤±5×10⁻⁴AU/小时。若噪音超标，需检查氘灯老化程度（替换阈值：能量<30%原始值）。

波长精度校准：使用外置标准石英比色皿，配制0.01mol/L K₂Cr₂O₇溶液（235nm/267nm/350nm三个特征峰），实测吸收峰位置与标称值误差需≤±1nm。

2. 蒸发光散射检测器（ELSD）增益调节

漂移管温度校准：设置载气流速2.0L/min，在30℃条件下，用10μg/mL蔗糖溶液测试，要求基线响应RSD<3%。若出现基线漂移>5%/小时，检查半透膜是否破损导致雾化不均。

场景化FAQ：

Q：检测器基线出现周期性波动，但无明显峰形信号？A：这是典型的流通池污染问题！需：①关闭检测器电源 ②注入50%异丙醇水溶液至流通池，超声波清洗15分钟 ③换用新的脱气膜（建议每周更换）

1. 色谱柱性能测试

柱效验证：使用苯系物混合物（苯、甲苯、乙苯、二甲苯），在254nm检测，理论塔板数需满足：苯≥100000，分离度R≥2.0（柱温30℃，5μm C18柱）。若柱效下降30%以上，需启动柱再生程序。

柱温箱校准：使用高精度水银温度计校准，要求箱内温度波动≤±0.1℃。若柱温偏差>0.5℃，需检查温控模块散热风扇是否积灰（建议每月用压缩空气清理散热孔）。

2. 保护柱与预柱维护

保护柱更换周期：当系统压力持续上升（>2.0MPa），保护柱吸附峰面积/主峰面积比>15%时，需立即更换。市售C18保护柱可重复使用次数约为50次，超过后需用乙腈+四氢呋喃（7:3体积比）冲洗再生。

1. 保留时间漂移排查

流动相梯度混合异常：检查在线混合器比例阀（常见故障：阀座卡涩），用30%乙腈水溶液冲洗比例阀，确保A/B通道比例响应延迟<0.5秒。

柱温波动影响：对比同一批样品在10℃与30℃色谱图，若保留时间漂移>5%，需检查柱温箱PTC加热丝是否出现半失效（热电阻阻值偏差>10%）。

2. 峰形拖尾/前延快速定位

拖尾峰：①检查pH值（缓冲液范围2.5-8.0），若样品为酸性需用0.1%磷酸调节至3.0；②柱头塌陷（色谱柱前端出现白色粉末），需用200mg/mL NaOH溶液浸泡柱头10分钟。

前延峰：多为柱过载，采用梯度洗脱时，设置初始B相比例>50%，避免样品在强保留区域堆积。

3. 系统清洗与维护周期

月度维护：更换保护柱滤芯，用0.45μm针头式过滤器过滤流动相（建议每周更换滤膜）。

季度维护：用50%甲醇冲洗泵单向阀（300μm孔径钛合金球座），超声清洗8分钟，超声液为5%硝酸溶液。

3月（春季）：完成12个月使用数据统计，生成关键指标趋势图（如泵压力历史曲线）

6月（夏季）：重点检测柱温箱散热系统，环境温度>35℃时加装散热风扇

9月（秋季）：进行系统惰性化处理，用100%四氢呋喃冲洗系统20分钟，防止残留污染物

12月（冬季）：低温环境下检查管路防冻情况（北方地区需将泵头浸入50mL保温套中）

结语：液相色谱仪的年度自查不是简单的清洁保养，而是对仪器”健康状态”的全面评估。当我们建立”压力波动预警-噪音阈值监测-基线漂移记录”的闭环管理体系，才能真正实现”数据可靠、成本可控”的实验室管理目标。