收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。 在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况: (一)细胞未长至 85%时,用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。(二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代，具体步骤如下1.弃去培养液,用 PBS 洗涤 1-2次; 2.加入 1.0m 胰酶消化液,37℃消化(消化时间根据不同细胞及所用胰酶有所差异),显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台,加入至少双倍的完全培养液终止消化并轻轻吹打细胞1-2次，使其变成单细胞悬液;3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散;4.加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代; 5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2.注:1.观察细胞密度最好用(4X物镜)低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度;观察细胞形态请用(10X或20X)高倍镜观察; 2.推荐使用 0.05%胰酶/EDTA消化液(推荐货号:CSP048); 3.瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养;4,有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内