一、检测概述

支原体是细胞培养中最常见的隐性感染源之一，可显著影响细胞增殖、代谢及实验结果的可靠性。为保障科研样本及细胞系的纯净性，本检测服务采用荧光定量PCR（qPCR）探针法进行支原体核酸检测，具有灵敏度高、特异性强、检测周期短等特点。

本方法基于国际主流检测体系（TAKARA Mycoplasma Detection Kit, CY232），并结合ABI ViiA7定量PCR平台实现实时荧光监测，可在单次反应中同时完成扩增与判定，适用于血清、培养基、细胞上清及细胞裂解液等多种样本类型。

二、检测原理

qPCR探针法通过特异性引物和荧光探针识别支原体保守基因序列（16S rRNA基因区），在反应体系中实时监测荧光信号变化。当样本中含有支原体DNA时，扩增曲线呈典型“S”型增长并出现阈值循环数（Ct值）；反之无扩增信号。依据阳性、阴性对照的曲线特征及样本Ct值判定是否存在支原体污染。

三、检测流程

1. 样本接收与保存：建议样本类型包括血清、细胞培养基、细胞上清等。样本需-20℃或-80℃冷冻保存并低温寄送。

2. 核酸提取：使用FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit（Vazyme, RC311）提取DNA模板，确保核酸纯度及完整性。

3. qPCR扩增：按照TAKARA CY232试剂盒标准体系配制反应液（总体系10 μL），并在ABI ViiA7仪器上进行50个循环扩增检测。

4. 数据分析与结果判定：系统自动生成扩增曲线并计算Ct值。样本Ct值＜30为阳性（检测到支原体核酸），Ct＞40或无扩增信号为阴性。

四、方法特点

· 灵敏度高：最低检测限可达10² copies/mL。

· 特异性强：探针识别支原体特异序列，有效避免交叉反应。

· 周期短：从样本接收到报告出具仅需1–2个工作日。

· 结果直观：提供完整扩增曲线图、Ct值表及判定说明。

· 兼容性强：适用于血清、培养基、细胞样品及含血清培养体系。

五、报告内容

检测报告包含：实验材料与仪器信息（离心机、PCR仪型号、试剂批号等）、反应体系配置与扩增程序、样本、阳性对照、阴性对照扩增曲线、Ct值统计表以及最终检测结论与说明。

1.扩增曲线

a.阳性对照样本检测结果

b.阴性对照样本检测结果

c.样本检测结果

六、检测周期与交付

常规检测周期为7个工作日，支持加急检测服务。结果可提供电子版及纸质版报告，报告格式规范，数据真实可溯，满足科研记录与实验申报要求。